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細胞學(xué)堂 | 細胞拉絲的五大常見(jiàn)原因及解決方法

更新時(shí)間:2024-07-12  |  點(diǎn)擊率:972


通常情況下,細胞在體外培養環(huán)境中大多呈現扁平、多角形或圓形等形態(tài),這些細胞形態(tài)對于細胞的營(yíng)養吸收、分裂增殖及物質(zhì)轉運等生理活動(dòng)至關(guān)重要。然而,不少研究者在實(shí)際培養過(guò)程中會(huì )遇到細胞形態(tài)異常的問(wèn)題,尤其是細胞出現“拉絲"現象。這一現象,往往伴隨細胞狀態(tài)變差,對實(shí)驗結果的準確性及實(shí)驗進(jìn)展構成了不容忽視的影響。




本期細胞學(xué)堂,我們將為您詳細介紹細胞培養過(guò)程中出現拉絲現象可能的原因,并針對性提供解決方法,助您細胞培養無(wú)憂(yōu)!





細胞拉絲常見(jiàn)原因及解決方法

拉絲為部分細胞的正常形態(tài)

某些細胞株在正常培養過(guò)程中,如SH-SY5Y(人神經(jīng)母細胞瘤細胞)和K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細胞),通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀(guān)察(如圖1和2所示),細胞本身形態(tài)就有拉絲和觸角狀形態(tài),是其正常形態(tài)。

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圖1. SH-SY5Y細胞形態(tài)

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 圖2. K7M2 wt細胞形態(tài)

  解決方法:


在初次培養不熟悉的細胞過(guò)程中,若觀(guān)察到拉絲現象,首先建議參考權-威細胞庫提供的細胞圖片,以鑒別該細胞本身是否具有拉絲的形態(tài)特征。對于本身形態(tài)就存在拉絲特征的這類(lèi)細胞,無(wú)需針對拉絲現象進(jìn)行特殊處理。然而,如果經(jīng)過(guò)對比明確細胞本身不具有拉絲的形態(tài)特征,且伴隨有細胞增殖變慢或其他改變時(shí),那么就需要進(jìn)一步排查可能的原因。




細胞接種密度過(guò)高或過(guò)低

細胞接種密度過(guò)高時(shí),細胞之間的營(yíng)養和空間競爭會(huì )加劇,這種競爭壓力可能導致細胞形態(tài)拉絲。若使用無(wú)血清培養基培養間充質(zhì)干細胞,接種密度過(guò)低,也可能導致細胞長(cháng)不起來(lái),細胞形態(tài)會(huì )逐漸伸長(cháng)拉絲。

  解決方法:


根據細胞的特性,選擇合適的接種密度,并定期進(jìn)行細胞傳代,將細胞密度維持在合適范圍內。




培養條件不當

如培養基配方錯誤、培養基中關(guān)鍵營(yíng)養物質(zhì)(如氨基酸、維生素、生長(cháng)因子等)不足、pH值變化、溫度波動(dòng)或氣體環(huán)境(如CO?濃度)不適宜,均可能影響細胞正常形態(tài)與功能,導致細胞拉絲。

  解決方法:


使用新鮮配制的培養基培養細胞;根據細胞的生長(cháng)情況,及時(shí)換液,確保培養過(guò)程中營(yíng)養充足;必要時(shí)可嘗試提高血清使用濃度(終濃度不超過(guò)20%)更換高品質(zhì)胎牛血清(如圖3所示)。

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圖3. Renca(小鼠腎癌細胞)細胞形態(tài)




操作不當

在處理如貼壁細胞等需要消化的細胞時(shí),解離試劑的選擇、消化時(shí)間的控制、操作力度的把握等都至關(guān)重要。解離試劑選擇不當、消化時(shí)間過(guò)長(cháng)或操作力度過(guò)大等均可能導致細胞受損,進(jìn)而引發(fā)細胞形態(tài)改變,出現拉絲現象。

  解決方法:


針對不同細胞選擇合適的解離試劑,控制消化時(shí)間,在消化過(guò)程中操作輕柔,最-大程度降低消化過(guò)程對細胞的損傷。




細胞污染

在細胞培養的過(guò)程中,若出現細菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)等污染,其與細胞爭奪營(yíng)養,同時(shí)產(chǎn)生有細胞毒性的代謝產(chǎn)物,將會(huì )導致細胞狀態(tài)明顯變差,細胞可能出現拉絲現象。

  解決方法:


提高細胞培養過(guò)程中的無(wú)菌操作意識,使用無(wú)菌試劑、耗材。對于支原體、黑膠蟲(chóng)等不易察覺(jué)的污染,可以定期檢測或空培確定是否發(fā)生污染。及時(shí)發(fā)現,及時(shí)處理,有效防止污染范圍的擴大。



以上就是關(guān)于細胞拉絲原因及解決方法的詳細解讀,更多細胞培養干貨,請持續關(guān)注細胞學(xué)堂專(zhuān)欄~