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人骨髓間充質(zhì)干細胞提取方法
人骨髓間充質(zhì)干細胞提取方法
更新時(shí)間:2023-08-15 | 點(diǎn)擊率:1528
作為常見(jiàn)的干細胞類(lèi)型,
人骨髓間充質(zhì)干細胞
廣泛應用于科學(xué)研究和臨床治療。細胞具有分化潛能,可以分化為各種類(lèi)型的細胞,如成骨細胞、成軟骨細胞和脂肪細胞等。它們在細胞替代治療、組織工程和再生醫學(xué)領(lǐng)域具有巨大的應用前景。下面將為您詳細介紹干細胞的提取方法。
首先,我們需要對提取的細胞進(jìn)行嚴格的質(zhì)量控制。這包括細胞活性檢測、純度檢測和細胞計數。細胞活性檢測通常使用MTT實(shí)驗,將細胞與MTT試劑混合,觀(guān)察細胞的生長(cháng)情況。純度檢測可以通過(guò)細胞計數和血球計數板計數來(lái)實(shí)現。細胞計數時(shí),將細胞懸液加入血球計數板,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進(jìn)行檢測。細胞計數的低標準為每毫升細胞數量大于100,000個(gè)。細胞計數后,還需對細胞濃度進(jìn)行檢測。
接下來(lái),我們將介紹人骨髓間充質(zhì)干細胞的提取方法。為了最大限度地保留細胞的活性,我們需要采用溫和的方法進(jìn)行提取。常用的提取方法包括小鼠骨髓提取法和人骨髓提取法。
1、小鼠骨髓提取法
首先,從小鼠的尾部提取約5毫升血液。然后,將血液離心,獲得紅細胞和血漿。血漿中含有間充質(zhì)干細胞。接下來(lái),通過(guò)免疫學(xué)實(shí)驗篩選出間充質(zhì)干細胞。最后,通過(guò)透射電子顯微鏡觀(guān)察細胞形態(tài),確保細胞結構完整。
2、人骨髓提取法
從成年供體獲取新鮮的人骨髓,并將其冷凍保存。在實(shí)驗室內,使用無(wú)菌手術(shù)刀或刮刀從供體骨髓中刮取骨髓組織。隨后,將骨髓組織放入緩沖液中,進(jìn)行漂洗和分離。離心后,收集上清液,并加入細胞分離液。使用懸浮細胞離心機進(jìn)行細胞分離,將骨髓中的間充質(zhì)干細胞提取出來(lái)。最后,使用流式細胞儀對提取出的細胞進(jìn)行檢測和鑒定。
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